概念與原理

（f）：

f= (As/ms)/(Ar/mr)

其中As和Ar分別為內標物和對照品的峰面積或峰高，ms和mr分別為加入內標物和對照品的量。

再取各品種項下含有內標物的待測組分溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，再根據含內標物的待測組分溶液色譜峰響應值，計算含量（mi）：

mi=f×Ai/(As/ms)

其中 Ai和As分別為供試品和內標物的峰面積或峰高，ms為加入內標物的量。必要時(shí)，再根據稀釋倍數、取樣量和標示量折算成為標示量的百分含量，或根據稀釋倍數和取樣量折算成百分含量。

內標物

定義

將一個(gè)已知質(zhì)量的純物質(zhì)，加入至待測樣品溶液中，以此純物質(zhì)的量為標準，對比測定待測組分的含量，該純物質(zhì)稱(chēng)為內標物。

選擇要求

a．原樣品中不含組分

b．與待測物保留時(shí)間應接近,但不重疊

c．為高純度標準物質(zhì)，或含量已知物質(zhì)

d.在給定色譜條件下具有一定化學(xué)穩定性。

影響因素

影響內標和被測組分峰高或峰面積比值的因素主要有化學(xué)方面的、色譜方面的和儀器方面的三類(lèi)。

由化學(xué)方面的原因產(chǎn)生的面積比的變化常常在分析重復樣品時(shí)出現。

化學(xué)方面的因素包括：

1、內標物在樣品里混合不好；

2、內標物和樣品組分之間發(fā)生反應，

3、內標物純度可變等。

對于一個(gè)比較成熟的方法來(lái)說(shuō)，色譜方面的問(wèn)題發(fā)生的可能性更大一些，色譜上常見(jiàn)的一些問(wèn)題對絕對面積的影響比較大，對面積比的影響則要小一些，但如果絕對面積的變化已大到足以使面積比發(fā)生顯著(zhù)變化的程度，那么一定有某個(gè)重要的色譜問(wèn)題存在，比如進(jìn)樣量改變太大，樣品組分濃度和內標濃度之間有很大的差別，檢測器非線(xiàn)性等。進(jìn)樣量應足夠小并保持不變，這樣才不致于造成檢測器和積分裝置飽和。如果認為方法比較可靠,而色譜柱看來(lái)也是正常的話(huà)，應著(zhù)重檢查積分裝置和設置、斜率和峰寬定位。對積分裝置發(fā)生懷疑的最有力的證據是：面積比可變，而峰高比保持相對恒定。

特點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)

1.測定的結果較為準確，由于是通過(guò)測量?jì)葮宋锛氨粶y組分的峰面積的相對值來(lái)進(jìn)行計算的，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差。

2. 操作過(guò)程中樣品和內標是混合在一起注入色譜柱，因此只要混合溶液中被測組分與內標的量的比值恒定，上樣體積的變化不會(huì )影響影響定量結果。

3.內標法抵消了上樣體積，乃至流動(dòng)相、檢測器的影響。

缺點(diǎn)

1.操作程序較為麻煩。

2.有時(shí)尋找合適的內標物也有困難。

注意事項

當配制校正因子測定用的對照溶液和含有內標物質(zhì)的待測組分溶液使用同一份內標物質(zhì)溶液時(shí)，則配制內標物質(zhì)溶液不必精密稱(chēng)（量）取。

采用內標法定量時(shí)，內標物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說(shuō)，內標物應當是一個(gè)能得到純樣的已知化合物，這樣它能以準確、已知的量加到樣品中去，它應當和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學(xué)性質(zhì)(如化學(xué)結構、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應特征，最好是被分析物質(zhì)的一個(gè)同系物。當然，在色譜分析條件下，內標物必須能與樣品中各組分充分分離。需要指出的是，在少數情況下，分析人員可能比較關(guān)心化合物在一個(gè)復雜過(guò)程中所得到的回收率，此時(shí)，他可以使用一種在這種過(guò)程中很容易被完全回收的化合物作內標，來(lái)測定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說(shuō)的選擇原則。